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      食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法

      放大字體  縮小字體 發布日期:2013-06-27  來源:生物無憂  瀏覽次數:9586
      核心提示:1 主題內容與適用范圍本文規定了食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法。本文適用于航空食品的檢驗。2 設備和材料吸管(
      1 主題內容與適用范圍
      本文規定了食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法。
      本文適用于航空食品的檢驗。
      2 設備和材料
      吸管(1ml、10ml)、恒溫培養箱(36±1℃、44.5±0.5℃)、冰箱、均質器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡等
      3 培養基和試劑
      月桂基硫酸鹽胰蛋白月示(LST)肉湯、煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯、EC肉湯、伊紅美藍瓊脂(EMB)、營養瓊脂斜面、色氨酸肉湯、MR-PV 培養基、Korser氏枸掾酸鹽肉湯、結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)、Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液、生理鹽水、革蘭氏染色液、 Kovacs氏靛基質試劑、甲基紅指示劑、Voges-proskauer(V-P)試劑、
      4 樣品制備
      4.1 以無菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內。如有包裝,則用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。
      4.2 制備樣品勻液
      以無菌操作取25g樣品,放入裝有225ml稀釋劑的滅菌均質杯內,于8000r/min均質1-2min,制成1:10的樣品勻液。如樣品均質時間超過2min,應在均質杯外加冰水冷卻。
      4.3 稀釋樣品勻液
      用10ml滅菌吸管準確吸取1:10的樣品勻液10ml,放入裝有90ml稀釋劑的150ml稀釋瓶中。迅速振搖,將樣品混勻,制成1:100的樣品勻液。
      5 大腸菌群的測定
      5.1 大腸菌群MPN值的測定
      5.1.1 對每個樣品,選擇適宜的三個連續稀釋度的樣品稀釋液。每個稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白月示(LST)肉湯,每管接種1ml。
      5.1.2 將接種管置于36±1℃的培養48±2h。
      5.1.3 觀察試管的產氣情況:檢查倒管內是否有氣泡產生,記錄在24h和48h內產氣的LST肉湯管數。如所有LST肉湯管均未產氣,則可報告為大腸菌群陰性;如有產氣者,則進一步作證實試驗。
      5.2 大腸菌群的證實試驗
      5.2.1 將所有產氣管用直徑為3mm的接種環移種到煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中。
      5.2.2 置BGLB肉湯管于36±1℃的培養48±2h。
      5.2.3 記錄所有BGLB肉湯管的產氣管數。
      5.2.4 結果報告:按BGLB肉湯產氣管數,查MPN表報告每克(毫升)樣品中大腸菌群的MPN值。
       6 糞大腸菌群測定
      6.1 用接種環將所有48±2h內產氣的LST肉湯管培養物移種于EC肉湯管中。
      6.2 將所有接種的EC肉湯管在30min內放入44.5±0.5℃水浴箱內,培養24±2h。水浴箱的水平面應高于肉湯培養基液面。應以已知為44.5℃產氣陽性的大腸桿菌和44.5℃不產氣的產氣腸桿菌或其他大腸菌群細菌作陽性和陰性對照。
      6.3 記錄EC肉湯管的產氣情況。產氣管為糞大腸菌群試驗陽性;不產氣管為糞大腸菌群試驗陰性。
      6.4 結果報告:按產氣管數,查MPN表報告每克(毫升)樣品中糞大腸菌群的MPN值。
      7 大腸桿菌測定
      7.1 將6.3條中的EC肉湯管繼續培養24h取其產氣管的培養物劃線接種于伊紅美藍(EMB)平板,36±1℃的培養24±2h。
      7.2 檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。
      7.3 如有典型菌落,則從每個平板上至少挑取2個典型菌落;如無典型菌落,則從每個平板上至少挑取2個可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位,移種到營養瓊脂斜面上,36±1℃的培養18-24h。
      7.4 將斜面培養物移種到下列培養基進行生化試驗。
      7.4.1 色氨酸肉湯:在36±1℃的培養24±2h后,加Kovacs氏試劑0.2-0.3ml,上層出現紅色為靛基質陽性反應。
      7.4.2 MR-VP培養基:在36±1℃的培養48±2h后。以無菌操作移取培養物1ml至13mm*100mm試管中,加5%萘酚乙醇溶液0.6ml,40%氫氧化鉀溶液0.2ml和少許肌酸結晶,振搖試管后靜置2h,如出現伊紅色,為VP試驗陽性。
      將 MR-VP培養物的剩余部分再培養48h滴加5滴甲基紅溶液。如培養物變紅色,為甲基紅試驗陽性,若變黃色則為陰性反應。
      7.4.3 Korser氏枸掾酸鹽肉湯:于36±1℃的培養96h記錄有無生長。
      7.4.4 LST肉湯:于36±1℃的培養48±2h,觀察試管中是否產氣。
      7.4.5 革蘭氏染色:取18h營養瓊脂斜面培養物作革蘭氏染色。大腸桿菌為革蘭氏陰性。
      7.4.6 大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下

        

      如出現上表以外的生化反應類型,表明培養物可能不純,應重新劃線分離,必要時做重復試驗。

      7.5 結果報告:大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢桿菌,發酵乳糖產酸產氣,IMViC試驗為++--或-+--,再根據LST肉湯陽性管數查MPN表,報告每克(毫升)樣品中大腸桿菌MPN值。

      注:本文參照SN0169-92《出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法》

       

      編輯:songjiajie2010

       
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