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      【答疑匯總】乳制品微生物實驗室技能提升培訓系列答疑之一:微生物法測定維生素篇(一)

      放大字體  縮小字體 發布日期:2022-05-09  瀏覽次數:71
      核心提示:2022年4月26-28日乳制品微生物實驗室技能提升培訓班線上直播完美收官課程結束后小伙伴們提出了工作中的一些疑問雖然老師進行了耐
       2022年4月26-28日

      乳制品微生物實驗室技能提升培訓班

      線上直播完美收官

      課程結束后

      小伙伴們提出了工作中的一些疑問

      雖然老師進行了耐心的解答

      小伙伴們感覺有些問題理解不到位

      希望有文稿版的

      利于鞏固學習

      小編根據小伙伴們反饋的問題

      對于老師們的答疑進行一一整理

      由于內容較多

      將分批分享給大家

      請各位小伙伴查收今日份的知識

       


       


      1.微生物試劑盒法測定中,試劑盒測定結果與傳統法結果差別大的原因是什么?

      傳統試管法和試劑盒方法原理相同,但反應體系、培養時間都有差異,但實際中發現兩種方法結果未有太大差異,如果兩種方法結果差異較大,建議從人、機、料、法、環等各個細節查找原因,關鍵要熟練操作。


       


       

       

      2.微生物試劑盒法測定中,不同人員在相同條件下測定結果差別大的原因是什么?

       

       

       

      微生物法測維生素,無論是傳統法還是試劑盒,建議實驗室固定每個項目的檢驗人員,至少保證一個項目2個人員操作,以保證數據的穩定,然后制定SOP,規定不同人員操作的變異系數差異允許范圍。




       

      3.微生物試劑盒法測定中,怎樣確保樣品稀釋在標準曲線之內?

       

       

      如果是樣品類型和含量比較固定,依靠經驗常規重復操作即可。如果是未知樣品,首先參考標簽標識,按照標準的含量推算和預判含量,如果不能確定某一個含量,一個樣品做2-3個稀釋度,保證某一個稀釋度在標曲范圍內。


       


       

      4.微生物法測定中,空白對照混濁如何解決?

       

       

      空白對照有未接種空白和接種空白兩種,如果是未接種空白渾濁,除去培養基基質的問題,最大的可能就是污染;接種空白渾濁,除去培養基和污染的因素,還有一個原因就是菌株發生變異,建議純化到MRS平板上,再挑單菌落,在進行傳代,如果還是不理想,建議更換菌株。




       

       

      5.老師,如果我的穿刺保藏的工作菌株保存3個月(標準規定保存1個月)后仍能傳代存活,是否可以繼續使用?

       

       

       

       

      標準上是一個月傳一代,目的為了保證菌株的活性。如果一定要保存3個月,中間應該增加對菌株的驗證,反倒麻煩。


       


       

       

      6.葉酸和VB12檢測時,在待測液制作環節時,您強調培養基煮沸后立即晾涼,我們實際應用是煮沸后自然晾晾,沒有立即冷卻,煮沸后到培養基使用大概用時2h

       

       

       

      立即冷卻,避免培養基顏色變深。


       


      7.老師,理解玻璃器皿泡酸是為了使器皿更加干凈,具體原因是什么呢?

       

      都是為了保證玻璃器皿無殘留,洗刷方式可以根據各自實驗室規定的操作過程進行操作,最終目的就是為了洗刷干凈無殘留。高溫烘干這步是必須的。


       


       

      8.老師,請問從種子培養液中接種到接種液中,接種量是i多少? 接種量不同會對結果有影響嗎?種子培養液為什么在接種到培養液,是為了活化傳代嗎?

       

       

      為了增加活性,如果是傳代的話一般100微升。接種量不同對結果沒有影響,培養時間可能會有改變。


       


      9.老師,加標的中間液是滅菌前加入還是滅菌后?還是哪一個步驟加進去?

       

      是滅菌前加入,為了保證和樣品處理再同一條件下。


       


       

      10.老師,我可以用吸光度值為橫坐標,生物素含量為縱坐標繪制標準曲線嗎?

       

       

      可以,看操作習慣,但是標準中明確了生物素含量為橫坐標。


       


       

      11.四個維生素實驗中避光是自然光還是所有光源?

       

       

      避開自然光。


       


      12.生物素測定在調pH值時,超過了規定的pH之后,可以用鹽酸調回來嗎,會影響結果嗎?

       

      不可以用HCl調回,如果需要pH值調回,需要用H2SO4,不額外引入氯離子。


       


      13.用玻璃具塞試管可以代替鋼管帽嗎?

       

      這里的玻璃具塞說的是膠塞是么,不建議使用,一是膠塞不能放到170以上的烘干箱烘干。而是在滅菌過程中氣體壓力改變會導致體積發生變化。實驗室可以訂制不銹鋼材質的試管帽。


       

       


      14.是否可以增加S2-S10的標曲濃度,如 乘以十倍?

       

      標準給出的濃度范圍,是菌液和標準出現適宜濃度梯度的范圍,如果提高濃度,可能導致標準曲線沒有梯度,實驗失敗。


       


      15.老師,請問進行生物素試劑盒法方法驗證時,是需要用質控樣還是用市場購買的奶粉就行?還有,是只需要采用試劑盒方法測定結果計算精密度、準確度等,還是要同時進行國標法測定后進行兩種方法的結果比較

       

      方法驗證是對該試劑盒在本實驗室內的使用和國標的符合程度,在人員不足、工作量較大的情況下作為國標方法的替代,所以對照的樣品建議用本工廠內的樣品,也可以購買質控樣和市售產品,對驗證的樣品進行國標法的檢測,再在同樣的實驗條件下,用試劑盒對該樣品測定,實驗室自己設置可以接受的變異范圍,然后對試劑盒的效果評價,參與評價的因素一定要包括準確度和精密度,由于試劑盒本身有檢出限和定量限,建議聯系試劑盒的供應商參與驗證?梢詤⒖嫉臉藴省渡唐坊称窓z測試劑盒方法評價》(SN/T2775-2011);《微生物檢測方法確認和驗證指南》(RBT033-2020)。



      編輯:songjiajie2010

       
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      關鍵詞: 乳制品
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