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      【匯總】大腸菌群測定標準取樣原則、常見問題及標準的選擇等

      放大字體  縮小字體 發布日期:2021-12-27  瀏覽次數:745
      核心提示:第一部分 GB 4789.3-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數第一法大腸菌群MPN法1、取樣原則:本標準中對應的檢樣
       第一部分 GB 4789.3-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數

       

      第一法 大腸菌群MPN法

       

      1、取樣原則:本標準中對應的檢樣量分別為0.1g(mL)、0.01g(mL)、0.001g(mL),根據樣品限量值,查閱附錄部分MPN表:

      1)無論固體或液體,當限量值為“<3.0”或其它任意能在標準“表1”中查到的數值,則分別取1mL 1:10的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1:100的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1:1000的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管;

       

      2)無論固體或液體樣品的限量值為“<0.3”或其它任意為MPN表中查到的數值縮小10倍的數值,則分別取10mL樣品1:10稀釋液接種到3管雙料LST肉湯管、分別取1mL 1:10的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1:100的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管(如蜂蜜的限量值為0.3MPN/g,即采取此做法)。

       

      2、凡產酸或產氣的LST管,都取1環接種GBLB肉湯管,凡BGLG產氣者記為陽性。


       

      第二法 大腸菌群平板計數法

      (常見問題匯總)

       

      1、VRBA培養相關問題
      1)所用器皿是否需要滅菌?
      答:不需要。配制培養基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌,但要求一定要清洗干凈,表面無污漬、無殘留。煮沸完成后,取下錐形瓶,用一般常用的衛生紙(軟紙)覆蓋瓶口,用橡皮筋纏繞,待冷卻至適宜溫度即可傾注培養基。在傾注培養基時,須點燃酒精燈,稍微灼燒錐形瓶口。


      2)如何保持“煮沸2min”?
      答:可以用電磁爐或電熱板進行加熱煮沸,在該培養基即將煮沸時調低溫度。實際操作時,不需要嚴格按照此要求進行,加熱煮沸數秒即可。原因:本培養基很難保持煮沸2min,一旦煮沸,則培養基很快上涌、翻騰,若不調低溫度或立刻采取其他措施,則培養基可在數秒內噴涌出來,嚴重者可噴涌2米以上、電磁爐周圍1—2米范圍內都是培養基飛濺的范圍(實驗室危險因子之一)。


      3)若培養基未用完,是否可以冷藏起來下次用?
      答:不可以。4789.28中已規定,固體培養基最多允許熔融1次(指的是經過高壓滅菌冷卻后的培養基還可以熔融一次后使用)。且VRBA培養基冷卻后,再次熔融時非常容易噴涌,若溫度控制不當,底部培養基熔融后很快就會發生噴涌(即培養基未完全熔融就會發生噴涌現象)。


      4)傾注完成后是否需要“覆蓋一層”?如何覆蓋?
      答:一般情況下不需要覆蓋。在實際操作過程中,若檢驗員初次接觸該食品(或食品品類),則有必要在傾注培養基后再覆蓋一層(原因是不清楚該樣品是否會發生蔓延)。而如此往復測試幾次后,若該樣品或食品品類均不存在蔓延現象,則以后的實驗中都不需要進行覆蓋。若重復多次測試后都有蔓延現象,則以后的檢驗中最好都進行覆蓋,最好是在原培養基已凝固或半凝固(不會發生晃動)時再傾注一層培養基(“一層”是指緩慢傾注培養基至培養基剛好能夠覆蓋整個平皿)。

      2、如何確定培養基上長的是不是大腸菌群?
      答:建議新手們認真按照標準進行證實試驗,此證實試驗簡單易操作,每一次VRBA上有菌落生長都進行證實試驗,如此往復3-4次,對于哪種形態才是大腸菌群已經能夠了然于心。

       

       

      第二部分、GB/T 4789.3-2003 《大腸菌群測定》——標準解讀

      (標準補充)

       

      1、由于MPN表中給出的檢樣量為1mL(g)、0.1mL(g)0.01mL(g)三個稀釋度,所以:

      1)無論固體或液體,當限量值為“<30”或其它任意能在標準“表1”中查到的數值,則分別取10mL 1:10的樣品勻液接種到3管雙料乳糖膽鹽發酵管、分別取1mL 1:10的樣品勻液接種到3管單料乳糖膽鹽發酵管、分別取1mL 1:100的樣品勻液接種到3管單料乳糖膽鹽發酵管(有時限量值≤300,也建議同樣操作);

       

      2)若液體樣品的限量值為“<3”,則分別取10mL樣品原液接種到3管雙料乳糖膽鹽發酵管、分別取1mL樣品原液接種到3管單料乳糖膽鹽發酵管、分別取1mL 1:10的樣品勻液接種到3管單料乳糖膽鹽發酵管,9管皆為陰性則符合該限量值。

       

      2、大腸菌群在EMB培養基上的典型形態特征,參考GB 5750-2006中總大腸菌群發酵法相關章節。但仍然建議:一旦有菌落數生長,無論是否為典型形態,都應挑取進行革蘭氏染色及證實試驗。

       

      3、最后一次證實試驗,凡乳糖發酵管產氣(無論氣泡大。┣腋锾m氏染色鏡檢為陰性則判定為大腸菌群陽性。

       

      第三部分、那如何判斷咱們的產品到底是應該用哪個版本的大腸菌群計數方法呢?

       

      以GB 2726-2016《食品安全國家標準 熟肉制品》為例,其中大腸菌群指標如下:

      該標準提到的檢驗方法并未寫明是按GB 4789.3-2016中的第一法還是第二法檢測,那現在按檢測標準來分析一下:

       

      1. GB/T 4789.3-2003的檢測結果單位為MPN/100克或MPN/100毫升”

       

      2. GB 4789.3-2016中的第一法中的檢測單位為“MPN/克或MPN/毫升”

       

      3. GB 4789.3-2016中的第二法檢測結果單位為“CFU/克或CFU/毫升”

      綜上,GB 2726-2016《食品安全國家標準 熟肉制品》中大腸菌群檢測應該為GB 4789.3-2016版中第二法。


      編輯:songjiajie2010

       
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      關鍵詞: 標準
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