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      【干貨分享】微生物接種方法--斜面、液體培養基、半固體穿刺接種方法知識匯總

      放大字體  縮小字體 發布日期:2021-12-07  瀏覽次數:14893
      核心提示:一、斜面接種(1)在肉膏蛋白胨斜面試管上,用記號筆寫上將接種的菌名、日期和接種者。(2)點燃酒精燈或煤氣燈。(3)將菌種試管
       一、斜面接種

       

      (1)在肉膏蛋白胨斜面試管上,用記號筆寫上將接種的菌名、日期和接種者。


      (2)點燃酒精燈或煤氣燈。


      (3)將菌種試管和待接種的斜面試管,用大拇指和食指、中指、無名指握在左手中,并將中指夾在兩試管之間,使斜面向上,成水平狀態,。在火焰邊用右手松動試管塞,以利于接種時拔出。


      (4)右手拿接種環通過火焰燒灼滅菌(參照實驗一),在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指,小指和無名指分別夾持棉塞(或試管帽),將其取出,并迅速燒灼管口。


      (5)將滅菌的接種環伸入菌種試管內,先將環接觸試管內壁或未長菌的培養基,達到冷卻的目的,然后再挑取少許菌苔。將接種環退出菌種試管,迅速伸入待接種的斜面試管,用環在斜面上自試管底部向上端輕輕地劃直線,勿將培養基劃破,也不要使環接觸管壁或管口。


      (6)接種環退出斜面試管,再用火焰燒管口,并在火焰邊將試管塞塞上。將接種環逐漸接近火焰,再燒灼。如果接種環上沾的菌體較多時,應先將環在火焰邊烤干,然后燒灼,以免未燒死的菌種飛濺出污染環境,接種病原菌時更要注意此點。

       

      二、液體培養基接種

      液體培養基接種是用接種環、移液器或吸管等工具,將菌體或菌液移至試管、三角瓶等容器中的液體培養基中的一種接種方法。其操作與前面斜面接種基本相同,但應注意:液體培養基試管管口或三角瓶瓶口略向上以免培養液流出;加入菌體時,應使接種環與管內壁輕輕研磨,使菌體擦下,塞好棉塞后,將試管在手掌心中輕輕敲打或輕輕搖晃三角瓶,使菌體混合均勻。

       

      1、試管液體接種

       

      試管液體接種是將一定體積的樣品混懸液加入到盛有指定液體培養基的試管內,或將一定體積、按標準規定條件下培養過的培養液接入盛有指定液體培養基的試管內(有時是指接種環取一環,或移液管移液器移取一定的體積,例如0.1ml、1ml等)。涉及試管液體接種的操作有MPN法檢測大腸菌群/大腸桿菌,以及沙門氏菌、單增李斯特氏菌的二次增菌轉接操作等。

      此處以用移液器將一定體積的樣品混懸液接入到盛有指定液體培養基的試管內為例,具體操作如圖。

       

       

      ①用酒精棉消毒操作臺面。將移液器吸頭盒放入酒精燈右側,靠近酒精燈放置。將需要進行液體轉接的試管插在試管架上,置于酒精燈左邊左手附近。將移液器調至合適的刻度放于右手附近的架子上。廢物缸放于右手能觸及的范圍內。

       

      ②點燃酒精燈,左手于酒精燈火焰附近打開移液器吸頭盒,右手持移液器用力插取吸頭兩下以防吸頭松動脫落,拔出移液器并蓋上移液器吸頭盒盒蓋。左手取待轉接液體試管,試管底部位于左手手心,移液器吸頭和試管口應在酒精燈火焰周圍的無菌區域之內。

       

      ③將試管伸向右手。右手食指,中指,無名指握住移液器,拇指靠在移液器按鈕上,小指和掌心下緣合圍夾住試管帽并用力拔出。如果操作者的手比較小,可以靠食指無名指和小指握住移液器,拇指仍靠在液體按鈕上。而中指向外伸,靠中指內側和食指、無名指外側夾住試管帽。將試管口和移液器吸頭靠近火焰,試管口灼燒一周,在火焰附近將吸頭剛好伸入試管口,抵住試管內壁下側,同時按住移液器按鈕至一檔(輕微推不動)。不要將移液器吸頭伸到試管底部,而應傾斜試管使液面傾斜至試管口附近并沒過吸頭尖端。右手拇指緩慢松開,使液體緩緩吸入洗頭,注意不要吸入空氣。如果有空氣吸入,必須將液體壓回試管重新吸取。當右手拇指完全松開時,撤離移液器,注意吸頭需盡量一直圍繞在在酒精燈火焰附近,并且吸頭務必保持向下姿勢以防止液體倒流入移液器內部引起污染。

       

      ④吸完液體后,將移液器撤離試管,移液器吸頭移到酒精燈火焰的遠離操作者的一側,將試管口在火焰上灼燒滅菌。

       

      ⑤滅菌后,右手小指迅速將試管帽蓋上,此時移液器吸頭仍然要在火焰形成的無菌區域內,不可離酒精燈火焰太遠。蓋上試管帽將試管歸位。

       

      ⑥左手取待轉接入液體的試管,右手保持移液器吸頭在酒精燈火焰附近。

       

      ⑦右手保持握移液器姿勢取下試管帽并灼燒管口。將吸頭抵靠在試管口的內壁上,緩緩推動移液器按鈕至底(完全推至第二檔,使殘存在吸頭尖端的液體也流出)。推出液體時注意不要將吸頭深入試管底部,也不要用力推導致液體飛濺。

       

      ⑧左手將試管口靠近火焰滅菌,移液器吸頭移到酒精燈火焰的另一側。再次灼燒試管口

       

      ⑨右手保持握移液器姿勢將試管帽蓋上,將試管歸位。移取液體完畢后,按壓移液器滑動桿使吸頭脫落至廢物缸,移液器放回架子。熄滅酒精燈,將臺面消毒并收拾干凈。

       

      2、三角瓶液體接種

       

       相對于試管的液體接種培養,三角瓶接種培養的優勢在于通氣效果好。多見于霉菌或一些細菌的復壯培養或者搖床培養等。操作與前面提到的液體試管接種操作基本相同,最后將液體加入三角瓶的時候,三角瓶傾斜,移液器吸頭抵在三角瓶的內壁,緩緩將液體加入,避免噴濺和氣泡,見下圖。

       

      向肉膏蛋白胨液體培養基中接種少量菌體時,其操作步驟基本與斜面接種時相同,不同之處是挑取菌體的接種環放入液體培養基后,應在液體表面處的管內壁上輕輕磨擦,使菌體從環上脫落,混進液體培養基,塞好試管塞后,搖動液體,使菌體在液體中分布均勻,或用試管振蕩器混勻。

       

      向液體培養基中接種量大或要求定量接種時,可將無菌水或液體培養基注入菌種試管,用接種環將菌苔刮下,再將菌種懸液以無菌吸管定量吸出加入,或直接倒入液體培養基。如果菌種為液體培養物,則可用無菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養基。整個接種過程都要求無菌操作。

       

       

      三、半固體培養基穿刺接種

      用接種針挑取菌種(針必須挺直),自培養基的中心垂直地刺入半固體培養基中,直至接近管底,但不要穿透,然后沿原穿刺線將針拔出,塞上試管塞,燒灼接種針。

       

       

      1、水平法

       

      左手將試管水平放置,右手拿接種針,將接種針水平穿入培養基中。

       

       

      水平穿刺操作

       

      2、倒立法

       

      右手將接種針豎直放置,左手將帶有培養基的試管倒立后,接種針穿入培養基中,見下圖。


      倒立法穿刺操作


      上述幾種接種法的無菌操作,凡未敘述的均按實驗一操作。試驗者應反復練習無菌操作接種技術,直至較熟練地掌握。

       

      四、將已接種的斜面、液體和半固體培養基放置28—30℃溫箱,培養2—3天后取出觀察結果。

      來源:節選自《食品微生物檢測工作指南》,圖片來源網絡,食品微生物檢測小編整理編輯。

      編輯:songjiajie2010

       
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