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      沙門氏菌常用培養基的配方及原理

      放大字體  縮小字體 發布日期:2016-12-23  來源:食品實驗室服務公眾號  瀏覽次數:19357
      核心提示:1、沙門氏菌簡介 沙門氏菌病的病原體。屬腸桿菌科,革蘭氏陰性腸道桿菌。已發現的近一千種(或菌株)。菌體大。0.6~0.9)(1~
      1、沙門氏菌簡介

        沙門氏菌病的病原體。屬腸桿菌科,革蘭氏陰性腸道桿菌。已發現的近一千種(或菌株)。菌體大。0.6~0.9)×(1~3)微米無芽胞,一般無莢膜,除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌外,大多有周身鞭毛。營養要求不高,分離培養常采用腸道選擇鑒別培養基。生化反應對本屬菌的鑒別具有重要參考意義。不液化明膠,不分解尿素,不產生吲哚,不發酵乳糖和蔗糖,能發酵葡萄糖、甘露醇、麥芽糖和衛芽糖,大多產酸產氣,少數只產酸不產氣。VP試驗陰性,有賴氨酸脫羧酶。DNA的G+C含量為50~53%。對熱抵抗力不強,在60℃15分鐘可被殺死。在水中存活2~3周。

      2、檢測流程見表1
      3、培養基原理

      微生物檢測培養基
       
      3.1 緩沖蛋白胨水Buffered Peptone Water

      用途:用于沙門氏菌、阪崎桿菌前增菌培養(GB2008標準)
      配方:(g/L)
      用法:稱取本品20.0g ,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,121℃高壓滅菌15分鐘備用。
       
      3.2 四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(TTB) Tetrathionate Broth Base
       
      用途:用于沙門氏菌選擇性增菌培養,需加入煌綠和碘液。
      配方:(g/L)
      用法:稱取本品93.55g,溶解于1050ml 蒸餾水中,加熱煮沸,臨用前加入 20%  碘液 20ml,0.5%  煌綠 2ml,現配現用,不宜久置。
       
      3.3 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)Selenite Cystine Broth
       
      用途:用于沙門氏菌選擇性增菌培養(GB、SN標準) 。
      配方:(g/L)
      用法:稱取本品23.0克,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,無菌操作分裝于滅菌三角瓶或試管中備用。當天制備當天使用,無需高壓滅菌。

      3.4 亞硫酸鉍瓊脂(BS)(GB4789)
       
      配方(g/L):
      用法:將前三種成分加入300 ml蒸餾水(制作基礎液),硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉分別加入20 ml和30 ml蒸餾水中,檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加入另一 20 ml和30 ml蒸餾水中,瓊脂加入 600ml蒸餾水中。然后分別攪拌均勻,煮沸溶解。冷至 80 ℃左右時,先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混勻,倒入基礎液中,混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻,倒入基礎液中,再混勻。調節 pH,隨即傾入瓊脂液中,混合均勻,冷至50 ℃~55 ℃。加入煌綠溶液,充分混勻后立即傾注平皿。
      注:本培養基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處,超過48h會降低其選擇性,本培養基宜于當天制備,第二天使用。
       
      3.5 XLD培養基XyloseLysineDeso
       
      用途:選擇性培養基,主要用于分離志賀氏菌屬,亦可用于分離沙門氏菌。
      配方:(g/L)
      用法:稱取本品5.7g,加熱攪拌溶解于100ml蒸餾水中,不要過分加熱,冷至 50℃左右時,傾入無菌平皿,部分開蓋干燥 2h,然后蓋上,備用。無需高壓滅菌。在 24小時內使用。
       
      3.6 HE瓊脂
       
      用途:用于沙門氏菌的選擇性分離培養(GB標準)
      配方:(g/L)
      原理:溴麝香草酚蘭和酸性復紅為pH指示劑,發酵糖產酸的菌落呈紅色,不發酵糖的菌落為藍綠色。
      用法:稱取本品 95.8g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中, 冷至50-55℃時,傾入無菌平皿,本培養基不需要高壓滅菌。
       
      生化培養基。
       
      3.7 三糖鐵(TSI)瓊脂Triple Sugar Iron Agar
       
      用途:生化培養基,用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選(GB2008標準)
      配方:(g/L)
      用法:稱取本品 64.5g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,加熱煮沸 1分鐘,分裝于 16mm× 150mm試管,121℃高壓滅菌 15 分鐘制成斜面長 4-5cm,底部長2-3cm。
       
      3.8 賴氨酸脫羧酶試驗培養基
       
      用途:用于細菌檢驗中賴氨酸脫羧酶試驗。
      配方:(g/L)
      用法:除賴氨酸以外的成分加熱溶解后, 分裝每瓶100 ml,分別加入賴氨酸。L- 賴氨酸按0.5%加入, DL-賴氨酸按1 %加入。調節 pH。對照培養基不加賴氨酸。分裝于無菌的小試管內,每管0.5 ml, 上面滴加一層液體石蠟,115 ℃高壓滅菌 10 min 。
       
      3.9 尿素瓊脂(pH 7.2)
       
      用途:生化培養基,用于細菌脲酶檢測(GB、SN標準)
      配方:(g/L)
      用法:稱取本品 2.1g,加熱攪拌溶解于 95ml 蒸餾水中,121 ℃高壓滅菌 15 分鐘,冷至 50-55 ℃,加入無菌的 40% 尿素水 5ml, 混勻,分裝試管, 放成斜面備用。注:本批粉末顏色呈粉紅色。
       
      3.10 糖發酵管
       
      配方:
      制法:
      ①葡萄糖發酵管按上述成分配好后,調節pH。按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小 管的小試管內,121℃高壓滅菌 15 min 。
      ②其他各種糖發酵管可按上述成分配好后, 分裝每瓶100 ml,121℃高壓滅菌15 min.另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌。將 5 mL糖溶液加入于100 mL培養基內,以無菌操作 分裝小試管。
      注:蔗糖不純, 加熱后會自行水解者,應采用過濾法除菌。
      試驗方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養物接種,于36 ℃±1 ℃培養, 一般2d~3d。遲緩反應 需觀察14d ~30d 。
      編輯:foodec007

       
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